本节内容将为您讲解病毒感染细胞实验的操作方法,具体步骤如下:

一、细胞铺板

1.首先,从培养箱中取出293T细胞,弃去上清。

2.加入PBS对细胞进行清洗后,再加入胰酶消化。

3.1min后,弃去胰酶,加入新鲜的培养基终止消化。

4.用移液枪吹散细胞。

注意:吹打细胞时营销引流,需轻轻吹打,不可用力过猛,否则会对细胞本身造成伤害,并且每个角落都要吹到,尽量避免产生气泡。

5.取1支1.5ml的EP管进行稀释细胞。

6.将稀释后的细胞混匀后,取10ul加入血球计数器中进行计数。

观察计数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察细胞计数板计算公式,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角16方格细胞总数细胞计数板计算公式,再根据公式计算细胞密度。

7.计数完成后,根据计数结果,对细胞进行稀释,终浓度为2E+5/ml。

8.细胞混匀后,将细胞悬液加到24孔板中,500ul/孔。

9. 铺板完成后,将24孔板放入培养箱中。

二、病毒加样(要求在生物安全柜中操作)

1.第二天,取出24孔板并做好标记。

2.将待检测样品加入到24孔板中。

3.最后,将加好的样品放入培养箱中,37℃,5%的CO2。

三、荧光拍照

1.48小时后,进行荧光拍照。

2.拍照完成后,将样品交给质控部门进行检测。

具体操作视频如下:

细胞计数方法_全血细胞计数三分类_细胞计数板计算公式

下期精彩

下期我们将为您推送实验操作视频系列之慢病毒包装与纯化实验,敬请期待!慢病毒载体己经成为表达外源基因或外源shRNA的常用载体形式之一, 并且广泛的应用于体外实验及体内实验的研究中。

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