本节内容将为您讲解病毒感染细胞实验的操作方法,具体步骤如下:
一、细胞铺板
1.首先,从培养箱中取出293T细胞,弃去上清。
2.加入PBS对细胞进行清洗后,再加入胰酶消化。
3.1min后,弃去胰酶,加入新鲜的培养基终止消化。
4.用移液枪吹散细胞。
注意:吹打细胞时营销引流,需轻轻吹打,不可用力过猛,否则会对细胞本身造成伤害,并且每个角落都要吹到,尽量避免产生气泡。
5.取1支1.5ml的EP管进行稀释细胞。
6.将稀释后的细胞混匀后,取10ul加入血球计数器中进行计数。
观察计数:将血球计数板放于显微镜的低倍镜下观察细胞计数板计算公式,并移动计数板,当看到镜中出现计数方格后,数出四角16方格细胞总数细胞计数板计算公式,再根据公式计算细胞密度。
7.计数完成后,根据计数结果,对细胞进行稀释,终浓度为2E+5/ml。
8.细胞混匀后,将细胞悬液加到24孔板中,500ul/孔。
9. 铺板完成后,将24孔板放入培养箱中。
二、病毒加样(要求在生物安全柜中操作)
1.第二天,取出24孔板并做好标记。
2.将待检测样品加入到24孔板中。
3.最后,将加好的样品放入培养箱中,37℃,5%的CO2。
三、荧光拍照
1.48小时后,进行荧光拍照。
2.拍照完成后,将样品交给质控部门进行检测。
具体操作视频如下:
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